打開離心機，冷卻至4℃。并將所用試劑、緩沖液、實驗、解剖工具、組織勻漿工具以及離心機轉(zhuǎn)子等預冷至4℃（或放在冰上預冷）。
1.1麻醉
麻醉大鼠（麻醉藥物注射/氣體麻醉均可）
1.2分離步驟
a)處死大鼠，從顱骨中解剖大腦（可選擇需要的腦區(qū)），將解剖后部分轉(zhuǎn)移至4℃分離緩沖液A（緩沖液配方見文末）中，洗去雜質(zhì)。
b)將組織從緩沖液取出，吸干多余水分，稱量，測定濕重。稱后，仍轉(zhuǎn)移到轉(zhuǎn)移至4℃分離緩沖液A中短時間保存
c)準備組織勻漿化：將組織取出，用分離緩沖液A潤濕，用尖頭剪刀（如眼科剪）將組織剪碎，剪至糊狀小塊。
d)使用4℃分離緩沖液A重懸組織糊狀小塊，然后轉(zhuǎn)移到預冷玻璃容器或離心管（該步驟可選擇將組織移入特定勻漿機套管中，重懸液體積可根據(jù)容器情況調(diào)整）中。
e)在1000轉(zhuǎn)/分鐘的轉(zhuǎn)速下或手動玻璃研磨，研磨8-10次，得到均勻無塊狀組織液。
f)轉(zhuǎn)移到50ml 離心管中，調(diào)整體積，得到約5%成分的勻漿液 (即每20 - 30ml勻漿液含有1g組織)。
g)4°C、1000 g離心10分鐘，留下上清液。
h)將上清液轉(zhuǎn)移到新管中， 4°C、6200 g離心10分鐘，棄上清液。
i)使用分離緩沖液B重懸線粒體(沉淀)， 4°C、6200 g離心10分鐘，棄上清液。
j)將沉淀物（即線粒體）重新懸浮在少量分離緩沖液B中（約1g組織中的線粒體懸浮液體積約1ml）。
k)將提取好的純化線粒體用于實驗。
2.1分離緩沖液A
化合物 | 最終濃度 | 1000 ml緩沖液所需量 |
Succrose | 320mM | 109.54 g |
Tris-Cl | 10mM | 1.211 g |
K+EDTA | 1mM | 0.372 g |
BSA | 2.5g/l | 2.5 g |
用Tris, HCl調(diào)節(jié)pH值至7.4
2.2 分離緩沖液B
不含BSA的分離緩沖液A。
Sumbalová Z, Kucharská J, Kristek F (2010) Losartan improved respiratory function and coenzyme Q content in brain mitochondria of young spontaneously hypertensive rats. Cell Mol Neurobiol 30:751-8.
1、獨有的光電聯(lián)合多參數(shù)實時動態(tài)檢測技術(shù)：
電化學實時動態(tài)檢測模塊：pO2（高分辨率極譜氧電極傳感器，耗氧率檢測分辨率為±1 pmol O??s-1?mL-1）、pH、H2O2、TPP+（測量線粒體膜電位）、H2S、NO、質(zhì)體醌；
熒光實時動態(tài)檢測模塊：MMP（測量線粒體膜電位）、ATP、Ca2+、ROS、NADH；
2、獨有的原代細胞、原代組織能量代謝快速檢測技術(shù)：
無需過夜培養(yǎng)、樣品快速檢測，更加客觀反映樣品更接近體內(nèi)的能量代謝水平；
3、獨有的多維度能量代謝分析平臺：
適應線粒體、細胞、組織塊、活檢樣品等不同層次不同水平的樣本檢測。
2
4孔板每孔單獨進行實驗，獨立切向流換液、加藥系統(tǒng)；
6
個試劑池，可實現(xiàn)4-5種藥物重復、多次準確加入及更換；
同時檢測產(chǎn)酸率、耗氧率、細胞膜電阻抗；
實現(xiàn)實時影像跟監(jiān)測相結(jié)合的儀器；
全自動移液站，可實現(xiàn)連續(xù)監(jiān)測幾小時、幾天、幾周至數(shù)月的長期實驗。
北京華威中儀科技有限公司成立于2006年，歷經(jīng)多年的積累與沉淀，華威公司已經(jīng)成為國內(nèi)領(lǐng)先實驗室設備的供應商/技術(shù)服務商。
北京華威公司深耕中國細胞能量代謝市場十二年，為全國的科研用戶提供從組織-細胞-線粒體一站式能量代謝解決方案。業(yè)務涵蓋細胞能量代謝技術(shù)交流/實驗技術(shù)支持/DEMO技術(shù)展示/設備銷售/應用技術(shù)指導等。
生物體能量代謝研究適用于多種學科：運動生理學、線粒體醫(yī)學、老齡化醫(yī)學、干細胞醫(yī)學、癌癥、肥胖、糖尿病、氧化應激、藥理與毒理、心血管類疾病、神經(jīng)退行性病變等。
生物體能量代謝在科學研究中具有重要的論證地位，細胞器線粒體作為能量供應的主要場所，參與生物體內(nèi)的絕大多數(shù)代謝過程，多種疾病的病理成因與線粒體損傷有關(guān)，通過預防線粒體損傷的發(fā)生、進行線粒體的移植治療以及促進線粒體的再生與自噬，往往能夠靶向針對疾病的病灶位點形成快速有效的治療策略，從而達到早預防早治療的目的；同樣，能量代謝為生物起源、線粒體發(fā)生以及生態(tài)適應性等多個領(lǐng)域提供生物進化的直接或間接證據(jù)，也為研究多樣化生態(tài)環(huán)境適應性、極端環(huán)境能量保障、能量供應大數(shù)據(jù)等方面提供理論基礎。
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德國INCYTON實時全息多參數(shù)細胞能量代謝分析系統(tǒng)
奧地利OROBOROS O2k細胞能量代謝分析儀
積極樂觀、科學創(chuàng)新、永不言敗是我們華威的精神，在過去十六年的工作中得到了廣大用戶的認可和高度評價，我們也會一如既往的堅持優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品、優(yōu)質(zhì)服務繼續(xù)服務于中國的科研事業(yè)。
